杆菌存储剂

‘壹’ —20度保存菌种，细菌能存活多久

要看保存液是什么，也要看细菌本身特性，我了解的如果用一般的肠杆菌存储液保存，至少脑膜炎奈瑟菌就不行，基本上几天就很容易大量死亡

‘贰’ 保存菌种需用不同ph值的菌液吗

保存菌种不需用不同ph值的菌液。

保存菌种的方法：
1.定期移植法
将菌种接种于所要求的培养基上﹐在最适温度中培养﹐至静止期或产生成熟的孢子时﹐置入 5℃的冰箱(或冰库)保存。在培养和保存的过程中﹐由于代谢产物的累积而改变了原菌的生活条件﹐结果菌落群体中的个体就不断衰老和死亡﹐因此每5～15天或 1～4个月重新移植一次﹐具体间隔时间因种而异。凡能人工培养的微生物都可用此法保存。此法不需特殊设备﹐但烦琐﹐费时﹐而且经常移植容易引起菌种退化。

2.矿油封藏法
将化学纯的液体石蜡(矿油)经高压蒸气灭菌﹐放在40℃恒温箱中蒸发其中的水分﹐然后注入斜面培养物中﹐使液面高出斜面约 1厘米。将试管直立﹐放在15～20℃室温中保存。由于在斜面培养物上覆盖一层液体﹐既能隔绝空气﹐又能防止培养基因水分蒸发而干燥﹐可以延长菌种保藏的时间。但注入的液体必须不与培养基混溶﹑对菌种无毒﹐不易被利用和挥发。此法适用于酵母菌﹑芽孢杆菌﹔不适用于固氮菌﹑乳酸杆菌﹑明串珠菌﹑法门氏菌和毛黴目中的大多数属种。此法简便易行﹐但必须注意防火和污染。

3.沙土管法
将沙或土过筛﹑烘干﹑装管﹑灭菌﹑然后将菌种制成孢子悬液滴入其中混匀﹐放到盛氯化钙的干燥器里吸除水分﹐干燥后保存或用火焰封管后保存。吸附在干燥沙土上的孢子因缺水而处于休眠状态﹐可保存较长时期。此法适用于芽孢杆菌﹑梭状芽孢杆菌﹑放线菌﹑镰刀菌等。

4.麸皮法
将麸皮制成培养基﹐培养要保存的菌种﹐待生长良好后﹐置干燥器中保存。这是根据中国酿造酒﹑醋﹑酱时制麴的经验所采用的一种保藏方法﹐适用于谷物微生物区系中的种类。

5.L－干燥法
又称液体干燥法或真空干燥法﹐用含3%谷氨酸钠的0．1M磷酸缓冲溶液 (pH7.0)做分散媒﹐将待保藏的微生物制成高浓度的细胞悬液﹐滴入无菌安瓿瓶中﹐每管0.05毫升﹔将安瓿瓶固定在多歧管上﹐并以水浴保持安瓿瓶内样品温度为10℃﹐在 13.3～1.3帕的真空度下干燥﹐火焰封管保存。此法不经冻结﹐用真实泵迅速抽乾﹐可避免菌种的冻伤或死亡。广泛应用于病毒﹑噬菌体﹑细菌﹑酵母菌﹑蓝藻﹑原生动物等。

6.梭氏法
将容有 1滴细胞悬液的小管﹐置于盛有氢氧化钾或五氧化二磷吸水剂的大试管中﹐用真空泵抽至1.3帕时﹐将大试管密封保存。这是为减少细胞死亡率而采取的一种不经冻结﹑缓慢脱水的干燥保藏法﹐适用于多种细菌﹑真菌。

7.冷冻真空干燥法
将细胞悬液每0.1～0.2毫升注入一无菌安瓿瓶﹐于-40℃预冻1小时﹐再于-20～30℃﹑真空度为13.3帕的条件下脱水。在脱水过程后期﹐安瓿瓶外温度可逐渐升至25℃。脱水后的样品含水量应在 3%以下。最后﹐将安瓿瓶保持真空度 1.3帕﹐用火焰溶封﹐置10℃保存。为防止细胞在冻结和脱水过程中损伤或死亡﹐要用保护剂制备细胞悬液。保护剂有脱脂牛奶﹑血清﹑10%蔗糖或葡萄糖溶液等﹐其作用是通过氧和离子键对水和细胞所产生的亲合力来稳定细胞成分的构型。此法适用于病毒﹑衣原体﹑枝原体﹑细菌﹑放线菌﹑酵母菌﹑丝状真菌等的长期保存﹐是当前保藏菌种的一个重要方法。但是﹐盐杆菌﹑发光杆菌﹑黏杆菌﹑阿舒囊黴﹑多囊黴﹑担子菌中的大多数属种不适用于此法保存。

8.液态氮超低温冻结法
用甘油或二甲亚(DMSO)作保护剂制备细胞悬液﹐分装入无菌安瓿瓶﹐每管0.2毫升﹐在控制温度下降速率为1℃/分钟的条件下预冻至-40℃﹐然后立即放入液氮生物贮存罐中气相(-150℃)保存。恢复培养时﹐先直接侵入38℃水浴中解冻 5～10分钟﹐再种植于适宜培养基内培养。这是根据在低于-130℃时一切生化反应处于停止状态﹑微生物也不能进行代谢活动而设计的冻结法。为避免冻死﹑冻伤和细胞内形成大量冰晶﹐用保护剂制备悬液并控制预冻时的冷却速率和解冻时融化速率。微生物的大多数属种适于慢速冻结和快速解冻。此法适用于病毒﹑枝原体﹑各种细菌﹑放线菌﹑酵母菌﹑丝状真菌﹑蓝藻等。

‘叁’ 甘油法低温保藏大肠杆菌

。。。
甘油和水是任意比混溶的。
不是甘油和种子液1:1，这个只是某个方法而已，重要的是甘油量要在20-50%之间不等，看你冻在多少度的冰箱里了。

但这个毕竟是短期的保藏方法， 你要保藏得久一点，或者再短一点，液氮、干燥、平板等等都是可以用来保藏大肠杆菌的，只是甘油法比较常用。

‘肆’ 双歧杆菌类的药物的储存是不是要放在冰箱里

胶囊类常温保存就可以.
针剂/液体最好是4摄氏度保存.

‘伍’ 大肠杆菌保存

以实验室要求来说，斜面培养基上的菌，还有菌液，都不是保存菌株的方法，那都是培养、扩增菌株用的，在4度放着，几天就不行了。

要保存菌株，应该采取甘油管的方式：取出一点发酵得到的菌液，按3:1加入甘油，搅匀，液氮速冻，然后放入-70度超低温冰箱，可保2年活力，需要使用时，冰上解冻，沾一点加到新培养基里活化培养。

如果你是想保存一大瓶菌液，比如说今天培养了一瓶或者一管，想放到冰箱等想用的时候再用……那我告诉你快算了吧，菌液只能现培养现用，细菌也是活的，怎么都放不住的，只能存个种，需要的时候再培养。

回答你的补充：原则上是现养现用，如果你实在懒，那可以把菌液放在4度冰箱，能用个1,2天。

‘陆’ 大肠菌群的保存方法

一．菌种的保存
重组 DNA 分子(质粒、噬菌体、粘性质粒)必须导入宿主菌中，通过细菌培养来扩增所需的重组 DNA。
通常采用宿主菌是大肠杆菌，根据不同载体需求，选用不同品系大肠杆菌
1. 概述：大肠杆菌其它微生物一样，都具有稳定遗传性和变异性、遗传性，保证微生物本身特征的相对稳定，即无性繁殖过程中能够保持原有的性状，为菌种保藏提供了有利因此，而变异性，使微生物的性状在繁殖过程中出现某些改变，给菌种保藏带来了困难。由于存在变异，即菌种常出现所谓的退化，主要指理想性状的丧失，从而导致发育缓慢，存活率和产质量降低等现象，菌种保藏工作就是使菌种的变异降低至最小水平，使菌种在较长期的保藏之后仍然保持着原有的生命力、优良生产性能、形态特征以及不污染杂菌。能够长期在研究上应用。
2. 微生物的变异速度，通常情况下，与其新陈代谢速度有关，微生物代谢活力旺盛，它的变异速度快，代谢活动微弱，变异速度就慢。并且在多次的无性繁殖过程中可能会有突变的积累。人们利用这一规律，可以创造各种条件，使微生物活动处于微弱活动或不活动状态，以减少变异的发生。
3. 菌种保藏的原理是：通过低温、干燥、隔绝空气和断绝营养等手段，以达最大限度地降低菌种的代谢强度，抑制细菌的生长和繁殖。由于菌种的代谢相对静止，生命活动将处休眠状态，从而可以保藏较长时间。要求保存的菌种在复苏后除保持以前的生活与繁殖能力、不发生形态特征、生理状态及遗传性状的
改变外，还不允许污染任何杂菌。此外，在保存前应确保菌种的单纯性，先分离单菌落后进行鉴定，然后再繁殖保存。
4. 常用的长期保存法有：液体石蜡法、硅胶保存法、加入甘油或二甲基亚砜（DMSD）等保护剂。
5. 甘油低温保存法(－70℃—－196℃)的特点
i.
甘油菌低温保存的基本原理是：在-70℃或液氮中冻存，细菌内的酶活性均己停止，即代谢处于完全停止状态，故可以长期保存。在0℃—-70℃温度范围内，水晶呈针状，极易招致细菌的严重损伤。用电镜观察，可见细菌的核膜上有大量针尖样小孔。因此，为了避免0℃—-70℃冰晶的形成和细菌膜两侧离子平衡的破坏，需要加保护剂。甘油可降低冰点，在缓慢的冻结条件下，能使细菌内水分在冻结前透出细菌外。贮存在-70℃以下低温中能减少冰晶形成，甘油对细菌无毒性，分子量小，溶解度大，易穿透细菌.
ii.
使用浓度范围为15%-50%，一般常用30%。在保存瓶中按1：1加入60%的甘油和菌液，混匀后贮存于-70℃或液氮中。复苏后细菌仍能生长，活力不受任何影响。
二、菌种的复苏
复苏菌种时，用接种环或牙签挑取少许冻结的菌种到平皿上，37℃培养8-12小时即可。甘油菌从冰箱取出使用时应置于低温或 0℃冰浴中，用完尽快放回，接种时挑取表面已融化部分即可，不可全溶，因反复冻融会导致细胞壁破裂。
切记：接种过程中不得使保存瓶中的菌液融化。
三、大肠杆菌培养
1.培养基配制：培养基从形态上分为液体与固体培养基。根据有无抗生素和其他选择性药物分为普通与选择培养基，常用LB培养基。
1）LB（Luria-Bertain)液体培养基配制
精解蛋白胨(bacto-tryptone)1.0%
酵母浸出粉(bacto-extract)0.5%
氯化钠1.0%
搅拌使之完全溶解，用5molNaOH(about0.2ml/1000ml培养基）调pH至7.0，如用进口试剂可不
必调， 高压灭菌20min(120℃ 0.1Mpa)
2）含琼脂的固体培养基配制
（1）普通培养基:固体培养基是在液体培养基中加 1.5%琼脂制成，先配液体培养基，然后加入 1.5%琼脂，高压灭菌20min，取出后再无菌状态下铺平板
（2）选择性培养基:将消毒好的固体培养基置室温下冷却50℃时加抗生素或其他必加成分，摇匀后倒入灭菌皿中厚度2-3mm, 室温固化。 (抗生素用三蒸水溶解后，用无菌滤头过滤到无菌瓶中, 氨苄青霉素终浓度 50μl/ml)新制备的固体培养基较湿，铺上的液体不易吸收，可在室温下放 2-3天，或37℃放半小时，然后4℃保存备用。
（3）LB培养基中所用抗生素终浓度：氨苄青霉素-50μl/ml；氯霉素-20μl/ml；庆大霉素-15μl/ml；卡那霉素-30μl/ml；春日霉素-1000μl/ml；壮观霉素-100μl/ml；链霉素-30μl/ml；四环素-12μl/ml。
注意：除了四环素保存-20℃，其余均应保存4℃，所有抗生素均应溶于无菌去离子水。四环素对光敏感
2.液体细菌培养
1）小量培养:
(1) 取灭菌 16 或 18mm 口径培养管，加 3-5mlLB 培养基，再加 50mg/ml 氨苄青霉素 3-5ul（宿主菌不加抗生素）
(2) 无菌牙签挑取单菌落，送入培养液中，或取菌液 5-10ul，转入培养液中，封好管口
(3) 37℃摇床培养 100-200r/min 至生长饱和，约 6-12 小时
2）大量培养:取 500ml 培养瓶内装培养基 100-200ml，及相应抗生素。以 0.5-1%浓度接种菌液，37 度摇床培养100-200r/min至OD值0.6-0.8。
3.固体细菌培养: 用于单一菌落的挑选，转化后抗性菌落的筛选。
方法：采用划痕接种法。用接种环从菌种中沾取少量菌液，划线。

‘柒’ 乳酸菌怎么保存可以存放多长时间

乳酸菌指发酵糖类主要产物为乳酸的一类无芽孢、革兰氏染色阳性细菌的总称。为原核生物。乳酸菌是一类能利用可发酵碳水化合物产生大量乳酸的细菌的通称。这类细菌在自然界分布极为广泛，具有丰富的物种多样性。它们不仅是研究分类、生化、遗传、分子生物学和基因工程的理想材料，在理论上具有重要的学术价值，而且在工业、农牧业、食品和医药等与人类生活密切相关的重要领域应用价值也极高。此外，这类菌中有些细菌又是人畜的致病菌，因此受到人们极大的关注和重视。
活性乳酸菌饮料必须在冷藏的条件下运输、销售和储存，否则在很短的时间内，里面的活性菌就会大量死亡，从而失去保健功能，甚至可能变成有害无益。
乳酸菌可以在常温下保存并保持活性，但是时间短，例如川秀乳酸菌经过30天的常温保存后，仍然可以正常使用，但是乳酸菌活性出现下降，酸奶发酵时间有可能被延长，但不影响发酵质量。 一般用添加保护剂的冷冻干燥保存效果好。
1、活性乳酸菌饮料由于含有大量、丰富的活性有益菌，而成为具有保健功能的时尚饮料，备受消费者欢迎。但是，日前，记者走访广州各大超市、商场时，发现很多品牌的活性乳酸菌饮料直接就摆放在货架上、在常温状态下销售。昨日，有关食品专家对此担心地表示，活性乳酸菌饮料必须在冷藏的条件下运输、销售和储存，否则在很短的时间内，里面的活性菌就会大量死亡，从而失去保健功能，甚至可能变成有害无益。
2、活性乳酸菌饮料能否在常温下储存、销售？“活性菌”到底保持多长时间的活性？活菌的数量达到多少才是有益人体？ 按照目前乳酸饮料国家标准，活性乳酸菌饮料应储存在2℃－10℃，保存期不少于1个月。据介绍，活性乳酸菌饮料在生产时一般不需要经过高温杀菌，所以在出厂后要冷藏销售、运输和储存，不能常温下存放。因为，在低温的状态下，活性菌活动可受到抑制，否则将会很快大量死亡。同时，也可抑制大肠杆菌、霉菌等细菌繁殖。“像这类食品，最好还是低温保存。”有关专家认为，最标准的储存温度是家庭冰箱里的4℃－5℃。
3、在常温状态下，保质期长达6个月、9个月是根本不可能的，放一周左右影响不大，但一周后活性乳酸菌数量就会迅速减少。即使可能保存到一个月，保留在饮料里的活菌量又有多少？据专家介绍，活性乳酸菌具有改善胃肠道功能(调节肠道菌群、促进消化)的功能，这种活性乳酸菌饮料本身是没有营养的，其蛋白质含量只有1％左右，消费者消费它的主要原因是看中它的保健功能，而活性乳酸菌也只有保持一定数量才能起到调节作用，若没有活菌或活菌量少，就没有任何作用了。华南理工大学轻工与食品学院副院长赵谋明还表示，在一般的冷藏条件下(约4℃)，一个月后活性乳酸菌的数量将会大量递减，存活下来的数量将会很少。而在常温下这一情况将更严重，两个月还存留的活菌数量更是非常少。
具有活性的乳酸菌饮料，按要求，每毫升活性乳中活乳酸菌的数量不应少于100万个。当人们饮用了这种饮料后，乳酸菌便沿着消化道进入到大肠，由于它具有活性，乳酸菌在人体的大肠内迅速繁殖，同时产酸，它的代谢产物可以降解食物大分子,使小分子进一步细化,更利于人体的消化和吸收.此外还有效地抑制腐败菌和致病菌的繁殖和成活。这种饮料要求在2~10℃下冷藏贮存和销售.在低温条件下,保证了饮品的质量和口感问题.密封包装的活性乳保质期为15天。活性乳酸菌饮品室温保存，第 3天活菌数为 107cfu/ml;第 7天活菌数刚刚达到 106 cfu/ml，到了第 10 天就降到了105cfu/ml;每隔3～4天下降一个数量级，而且酸度迅速上升。室温保藏活性乳酸菌饮品，由于温度较高，适合于很多细菌生长，一些易染杂菌繁殖较快，可能会导致饮品的变质，随着保存时间的加长，产品组织状态也会发生变化，有乳清析出，粘度下降，口感不细腻，味道过酸，从而影响了质量。
按照目前乳酸饮料国家标准，活性乳酸菌饮料应储存在2℃－10℃，保存期不少于1个月。活性乳酸菌饮料在生产时一般不需要经过高温杀菌，所以在出厂后要冷藏销售、运输和储存，不能常温下存放。因为，在低温的状态下，活性菌活动可受到抑制，否则将会很快大量死亡。同时，也可抑制大肠杆菌、霉菌等细菌繁殖。像这类食品，最好还是低温保存，最标准的储存温度是家庭冰箱里的4℃－5℃。
如果是乳酸菌饮料，室温保存可以3-5天，时间不宜太长，如果是其他乳酸菌食品，建议冰箱4-5度保存，乳酸菌不宜在室温下保存。如果单单是为了使该菌存活，也最好不要室温保存，因为过了指数生长期后，会渐渐衰老！
有关食品专家对此担心地表示，活性乳酸菌饮料必须在冷藏的条件下运输、销售和储存，否则在很短的时间内，里面的活性菌就会大量死亡，从而失去保健功能，甚至可能变成有害无益。
乳酸菌在常温下只能短时间保存，否则可能变质或活性下降，还是建议低温保存比较好。
活性乳酸菌饮料由于含有大量、丰富的活性有益菌，而成为具有保健功能的时尚饮料，备受消费者欢迎。但是，日前，记者走访广州各大超市、商场时，发现很多品牌的活性乳酸菌饮料直接就摆放在货架上、在常温状态下销售。昨日，有关食品专家对此担心地表示，活性乳酸菌饮料必须在冷藏的条件下运输、销售和储存，否则在很短的时间内，里面的活性菌就会大量死亡，从而失去保健功能，甚至可能变成有害无益。
华南理工大学食品科学与工程系主任曾庆孝教授在接受记者采访时表示，按照目前乳酸饮料国家标准，活性乳酸菌饮料应储存在2℃－10℃，保存期不少于1 个月。据介绍，活性乳酸菌饮料在生产时一般不需要经过高温杀菌，所以在出厂后要冷藏销售、运输和储存，不能常温下存放。因为，在低温的状态下，活性菌活动可受到抑制，否则将会很快大量死亡。同时，也可抑制大肠杆菌、霉菌等细菌繁殖。“像这类食品，最好还是低温保存。”有关专家认为，最标准的储存温度是家庭冰箱里的4℃－5℃。

‘捌’ 大肠杆菌与黑曲霉分别采用什么保藏方法为好,为什么

大肠杆菌适宜冷冻保藏，有条件的话按比例加入甘油做保护剂在－70℃低温冰箱保存，也可以在－30～－20℃普通冰箱