如何配置不同激素浓度的培养基
Ⅰ 配置培养基的原则有哪些
还是很多的。
培养基配制应遵循的原则
1、 根据不同微生物的营养需要配制不同的培养基。
2、 注意各种营养物质的浓度及合适配比,保持合适渗透压 。
3、 将培养基的 pH 控制在适宜的范围之内,以利于不同类型微生物的生长繁殖或代谢产物的积累。
4、 经济节约的原则。在所选培养基成分能满足微生物培养要求的前提下,尽可能选用价格低廉,资源丰富的材料作培养基成分。
5、控制氧化还原电位。对厌氧的微生物尤其重要。
6、培养基应无菌。故在培养基配制后应彻底杀死培养基中的杂菌 。
Ⅱ 关于配制植物组织培养所用的MS培养基中激素量的问题。
6-BA要加0.1毫克;
NAA要加0.3毫克。
解:因为1000毫升=1升
而6-BA每升要用0.1毫克
NAA每升要用0.3毫克
1*0.1=0.1(毫克)
1*0.3=0.3(毫克)
所以6-BA用0.1毫克;
NAA用0.3毫克。
Ⅲ 现在需要1.2mg/L的激素KT用于组织培养,我想配50ml,怎么配置呢然后配置1L的培养基时吸取多少呢
你好!
配置50ml需要激素KT0.06mg,配置1L的培养基时要看你配方里激素的用量才可以确定吸取多少。
打字不易,采纳哦!
Ⅳ 怎样配制不同浓度的高糖培养基
怎样配制不同浓度的高糖培养基
先配置一个高浓度的高糖培养基,
然后顾虑后按比例配置
Ⅳ 培养基中激素的种类及其浓度配比为什么能够决定产生花药植株的两种途径
因为具体来讲生长素和细胞分裂素的作用机理不同。书本上生长素类似物促进插条生根的实验。所以生长素多,生根多。
Ⅵ 培养基激素种类和浓度如何确定
可以参照相同物种或相似物种的组织培养用的激素,如果没有的话就只能设计梯度正交试验进行确定了!
Ⅶ 关于配制MS培养基中激素浓度换算的问题
1mg/ml是1mg/L的一千倍,所以配1000ml加1ml母液就对了,稀释一千倍。
Ⅷ 植物组织培养中激素浓度和相对比例如何确定
组织培养中对培养物影响最大的是外源激素。在基本培养基确定之后,实验中要大量进行的工作是用不同种类的激素进行浓度和各种激素间相互比例的配合试验。在实验中,首先应参考已有的报道,看是否有用相同植物、相同组织或相近者做过成功或失败的试验,如果有
则可直接作为参考;如果没有,则在建立激素配比中,将每一种拟使用的激素选择3~5个水平,再按随机组合的方式建立起如下的实验办案。
这样就设计出了16种激素配比的实验方案,即16种不同的培养基。用这16种培养基进
行初试之后,你会找到1种或几种是比较好的。再在这些比较好的组合的基础上进行小范围
的调整,设计出一组新的配方。如在表1-2中,认为6号培养基较有希望,就可以在此基础上
做出如表1-3的一组新的设计。
一般来说,经过这次实验就可能选出一种适合你的实验材料的培养基,或许不是最好的,但结果是可靠的。在此基础上可进行培养基中其他成分的变动实验,如可变动蔗糖浓度、
琼脂用量、培养基的pH值或添加某些氨基酸等。但必须掌握一个原则,就是要有理有据,特别是对一些宝贵的植物培养材料,更要慎之又慎。
如果上述试验失败,那就要做一些更细致、更麻烦的实验,花费更多时间、人力和物力,而且最好在专业人员的指导下进行,切莫根据想象来随意设计培养基,这样成功的概率极小,使宝贵的植物材料丢失或失去时机。
以上仅供参考,具体看你做什么材料,欢迎追问,满意请采纳,谢谢!!
Ⅸ 怎样配制母液和培养基
配制培养基是花卉组织培养的首要环节。培养基的成分随着花卉的种类、不同的外植体、不同的培养阶段应当有所不同。一般来说,各种培养基都有大量元素、微量元素、维生素、激素、糖和琼脂等物质,有时还要在培养基里添加有机附加物,如活性炭、香蕉汁、椰子汁等。在生产上,首先选用已有的培养基配方,它是前人研究的成果,又是经过生产实践验证的。现在几乎各种花卉用的营养基配方都有,可以免去您再研究的麻烦,当然在生产实践中,也可适当改进。如果您找不到合适的配方,可先试用MS培养基,MS是Murashige和Skoog的缩写,他们二人于1962年研究出来了这种培养基。下面以MS培养基为例,介绍怎样配制。
(1)配制母液。把培养基中的必需元素按原配方量的50倍、100倍或1000倍称量后制成一种浓溶液,这种浓溶液叫母液。在配制培养基时按比例分别量取母液稀释到所需的浓度即可。母液配好后贴上标签,放在0~4℃的冰箱中,可使用半年到1年,这样做可节省许多时间。可能产生化学反应的或溶解后产生沉淀的,不能放在同一个容器中。配制母液要用重蒸馏水。药物要使用分析纯或等级较高的化学纯。药物的称量和药液的定容都要准确。
母液①:硫酸镁18.5克,硝酸铵82.5克,硝酸钾95.0克。加水定容到1000毫升,浓度为培养基的50倍,配1升培养基时量取20毫升母液。
母液②:氯化钙22.0克。加水定容到500毫升,浓度为培养基的100倍,配1升培养基时量取10毫升母液。
母液③:磷酸二氢钾8.5克。加水定容到500毫升,浓度为培养基的100倍,配1升培养基时量取10毫升母液。
母液④:乙二胺四乙酸二钠3.73克,硫酸亚铁2.78克。加水定容到1000毫升,浓度为培养基的100倍,配1升培养基时量取10毫升母液。
母液⑤:硼酸620毫克,硫酸锰2230毫克,硫酸锌860毫克,硫酸铜2.5毫克,碘化钾83毫克,钼酸钠25毫克,氯化钴2.5毫克。加水定容到1000毫升,浓度为培养基的100倍,配1升培养基时量取10毫升母液。
母液⑥:肌醇5克,甘氨酸100毫克,烟酸25毫克,盐酸吡哆醇25毫克,盐酸硫胺素5毫克。加水定容到500毫升,浓度为培养基的100倍,配1升培养基时量取10毫升母液。
(2)配制培养基。配制每1000毫升培养基,称取6~10克琼脂作凝固剂,具体按配方要求称量,放在水浴锅上慢慢溶解。先在量筒内放入一定量的水,按照母液顺序和规定量,量取母液。当母液加完后,根据需要每升培养基再加入生长调节物质如吲哚乙酸或萘乙酸等,细胞分裂素类0.04~10毫克,细胞分裂素应用最多的是6-苄基腺嘌呤,加完后倒入已熔化的琼脂中。每1000毫升培养基加入蔗糖30克或根据要求确定,定容到所需的体积。继续加温,直到琼脂完全熔解。用盐酸或氢氧化钠对培养基的pH进行调节,多数培养基的pH在5.4~6.0之间,MS培养基的pH为5.7。
将配好的培养基趁热倒入培养容器中,培养基占容器体积的1/3~1/4。不要将培养基沾到容器壁上,否则容易被杂菌感染。然后及时加盖,进行高压灭菌,灭菌时要按高压灭菌锅的操作规程使用。在121℃、压力111千帕下维持15~20分钟,温度和时间都要严格控制。到时间后立即切断电源,当高压锅内压力降到常压后,开启放气阀,打开锅盖,取出灭菌好的培养基,放在接种室中培养3天,没被感染后才能用来组织培养。
Ⅹ 配置培养基的基本步骤有哪些应注意什么问题
培养基的配置应该注意的几大步骤:
1、常用玻璃仪器的准备制备培养基所用的吸管、锥形瓶、毛细吸管、平皿等玻璃仪器用前要用肥皂水洗刷后用清水冲洗干净,晾干后备用。
(1)平皿用纸或布包好,或装在金属盒内,于121℃高压蒸汽菌3min后烘干,备用。
(2)试管管口用棉花塞或硅氟塑料试管塞塞好,再用布或报纸包扎好,121℃高压蒸汽灭菌20℃后烘干,备用。
(3)吸管及滴管先用少许棉花塞于吸口端(防止污染物吸出,或橡皮帽内的气体污染),然后用纸包后或装入金属吸管筒内,于121℃高压蒸汽灭菌20min后烘干,备用。其他玻璃器皿均应按上法处理,也应装金属筒内160℃干热灭菌2h后,备用。
2、培养基的制备及储存
(1)溶化:一般应放在玻璃器皿或搪瓷齐内。加入蒸馏水,隔水加热以促其溶解,加热时应经常搅拌,防止焦结,待其溶解后补足水分。
在使用干燥培养基时,先将蒸馏水按定量加入容器中,然后称取一定量培养基干粉放入水中,静置10—15min,搅拌,振荡,或延长时间以促进溶解,一般不要热,必要时加热,但时间不宜过长,温度不宜过高,避免某些营养成分被破坏。
(2)校正酸碱度(调节pH):培养基必须有适当的pH。因此测定pH是培养基配制过程中的重要步骤之一,测定pH的标准温度为25士2℃。调节pH可用无菌的1mol/l氢氧化钠溶液或10%碳酸钠溶液、1mol/l盐酸溶液。当调节缓冲液的pH时,宜用6mol/l磷酸或10mol/l氢氧化钾溶液。灭菌后的pH会比灭菌前的pH升高或降低,一般高压灭菌前培养基的pH会比最终pH调高0.2左右,灭菌后基本合适。因此对培养基、缓冲液、试剂在灭菌前后的pH均进行测定,并记下每次pH的测定结果,有助于积累数据考察每种培养基、缓冲液、试剂对灭菌程序的耐受性,从而指导灭菌前pH的调节。干燥培养基一般已校正过pH,用时也必须再验证。测定时,一般用指示剂滴入培养基观察其颜色的变化,或用pH计校正,如与所需pH不符,可用以上的酸或碱液加以校正。调整pH后要加热过滤,使培养基澄清。( 更多质量检测、分析测试、化学计量、标准物质相关技术资料请参考中国标准物质 www.rmhot.com)
(3)培养基的分装:大批量配制时使用的自动分配器须经校准和确认。每次使用前后,均要对分配器的管道系统进行冲洗,在分装无菌培养基前,则要采用无菌硅胶管。
固体培养基一般分装在250ml、500ml锥形瓶中,高压灭菌后根据需要分装平皿或试管。
平皿:倾注平皿,应在无菌室中放置3—4h,如用塑料平皿须在35℃培养箱 中倒置30—60min。让水蒸汽自然蒸发。
斜面:制备低层斜面分装于试管,约占容积1/5,灭菌后趁热斜放在细玻璃棒和木杆上,使成斜度,分装使注意管口和瓶塞上勿沾有培养基,如沾有培养基应用布抹去,以避免污染。
高层斜面:制备高层斜面分装于试管,约占试管容积的1/3,灭菌后趁热放置成高层短斜面,待其凝固后应用。
分装好的培养基或缓冲液等及时密封后必须在配制当天(2h内最佳)进行灭菌处理。液体、半固体培养基一般在高压灭前分装,约装试管容积的1/3,在灭菌后还要加其他成分的液体、半固体培养基,灭菌后再分装于灭菌试管或锥形瓶中。
培养基的灭菌:培养基的灭菌多采用高压蒸汽灭菌,各种培养基的灭菌时间和压力,按其成分不同而定。普通培养基采用121℃、103.42kPa灭菌15min,但容器和装量较大时,应延长至20min。含糖培养基115℃、68.85kPa灭菌30min。含糖、血清、 鸡蛋等培养基可用流动蒸汽及血清凝固器80—100℃、30min,连续3d,间歇灭菌。血清或组织液,采用低热56—58水浴1h,连续5—6d灭菌,一些遇高温即被破坏的物质如尿素、腹水等,可用细菌过滤器,过滤除菌。高压灭菌应严格按照操作规程执行,必须逐渐加热,彻底排除灭菌器内的空气,再逐渐升压保持预定的压力和时间,达到全部杀灭微生物。以上的灭菌时间和温度要经过验证确认,如不同类型培养基混合一起灭菌时宜采用115℃、68.85kPa灭菌30min为好。
通过无菌技术为测试制备的每一批培养基其PH在放冷至室温(25°)后,都应测定。一个扁平的pH计用于培养基表面pH值的测定,浸入式的pH计用于液体的测定。各供应商提供的培养基的pH应该在规定的±0.2的范围内,除非通过验证得到更宽的范围
注意:按配方计算培养基中各种成分的用量→称量,(一般动作要迅速一些,因为其中可能有些成分容易吸潮)→溶化(将称好的各种成分溶解在水中,如果是固体培养基,需要使用凝固剂,如琼脂等,熔化时,注意搅拌,防止糊底)→调pH→灭菌(高压蒸汽灭菌)→倒平板
1)确认培养基的成分,并精确称量;
2)加入各个成分的顺序;
3)准确调pH;
4) 适当的灭菌方法;
5)无菌条件下分装.