自来水培养基怎么配置

㈠ 培养基怎么配置

（1）配制母液。把培养基m的必需元素按原配方量的50倍/100倍或1000倍称量后制成一种浓溶液，这种浓溶液叫母液在配制培养基时按比例分别量取母液稀释到所需的浓度即可母液配好后贴上标签，放在0～4℃的冰箱中可使用半年到1年，这样傲可节省许多时间可能产生化学反应的或溶解后产生沉淀的不能放在同一个容器m配制母液要用重蒸馏水药物要使用分析纯或等级较高的化学纯药物的称量和药液的定容都要准确。

母液①：硫酸镁18.5克．硝酸铵82.5克．硝酸钾95.0克；加水定容到1000毫升，浓度为培养基的50倍，配1升培养基时量取20毫升母液

母液②：氯化钙22.0克加水定容到500毫升，浓度为培养基的100倍，配1升培养基时量取10毫升母液

母液③：磷酸二氢钾8.5克加水定容到500毫升，浓度为培养基的100倍，配1升培养基时量取10毫升母液。

母液④；乙二胺四乙酸二钠3.73克硫酸亚铁2.78克，加水定容到1000毫升，浓度为培养基的100倍，配1升培养基时量取10毫升母液

母液⑤：硼酸620毫克，硫酸锰2230毫克，硫酸锌860毫克，硫酸铜2.5毫克，碘化钾83毫克，钼酸钠25毫克，氯化钴2.5毫克，加水定容到1000毫升，浓度为培养基的100信，配1升培养基时量取10毫升母液。

母液⑥：肌醇5克，甘氨酸100毫克，烟酸25毫克，盐酸吡哆醇25毫克，盐酸硫胺素5毫克，加水定容到500毫升，浓度为培养基的100倍，配1升培养基时量取10毫升母液

（2）配制培养基。配制每1000毫升培养基．称取6～10克琼：脂作凝固剂，具体按配方要求称量，放在水浴锅上慢慢溶解，先在量筒内放入一定量的水，按照母液顺序和规定量，量取母液，当母液加完后，根据需要每升培养基再加入生长调节物质如吲哚乙酸或萘乙酸等，细胞分裂素类0.04～10毫克，细胞分裂素应用最多的是6-苄基腺嘌呤，加完后倒入已熔化的琼脂中，每1000毫升培养基加入蔗糖30克或根据要求确定，定容到所需的体积，继续加温，直到琼脂完全熔解，用盐酸或氢氧化钠对培养基的pH进行调节，多数培养基的pH在5．4～6.0，MS培养基的pH为5.7。

将配好的培养基趁热倒入培养容器中，培养基占容器体积的1／4～1／3不要将培养基沾到容器壁上，否则容易被杂菌感染，然后及时加盖，进行高压灭菌，灭菌时要按高压灭菌锅的操作规程使用．在121℃、压力111千帕下维持15～20分钟，温度和时间都要严格控制，到时间后立即切断电源，当高压锅内压力降到常压后，开启放气阀，打开锅盖，取出灭菌好的培养基，放在接种室中培养3天，没被感染后才能用来组织培养

㈡ 培养基的配制

1.配料：

配方换算→在容器中加入少量水（蒸馏水，自然水）→按照配方称取各种药品（依次加入）→加足所需水量。

2.溶解：

淀粉溶解：少量冷水调成糊状。加热溶解，边加热边搅拌以防止烧焦。

3.调PH：

用1N的盐酸或1N的NaOH把培养基调节到所要求的值。

4.过滤：

滤纸或棉花进行过滤。

5.分装：

一般培养基放在三角瓶或试管中灭菌使用。

6.包扎：

分装好后，塞上棉塞，在用牛皮纸将棉塞包裹好，防止灭菌时水份进入把棉塞弄湿。

7.灭菌：

按配方上要求的温度、压力进行高压蒸汽灭菌。如果灭菌的温度太高，营养成分会被破坏。

8.贮存：

培养基在30℃下放置一天，无污染的即可使用。一般用牛皮纸包裹好存放于2-8℃冰箱中备用。

(2)自来水培养基怎么配置扩展阅读

培养基在使用前通过高压或过滤灭菌。防止污染应该注意以下事项：

确认工作细胞库是否被污染，确认毒种工作种子批是否被污染，确认所用培养基及其添加成分是否被污染，均可用细菌、真菌及支原体无菌试验来确认并排除。

同时要对无菌试验培养基的灵敏度进行验证。实际生产中，可以从配制好的培养液中取少量加入营养琼脂于恒温培养箱内培养，48小时即可观察有无污染。

将有毒区与无毒区严格分开，并有各自独立的空气净化系统及孵室，有毒区对无毒区应保持相对负压，防止病毒对培养细胞(尤其是细胞库)的污染。

参考资料

培养基-网络

㈢ 培养基的常规配制程序是什么

1、称量好培养基的各个成分，如果是商品化的干粉培养基则按说明称取。
2、加入足量的水，溶解混匀，必要时调节PH值。
3、如果有必要，可进行分装。
4、灭菌，一般来说，含糖培养基115℃20min，不含糖培养基121℃20min
5、如果是配置平皿培养基，则趁凝固前倾注平皿。

㈣ 培养基的配置应该注意哪几大步骤

楼主你好：
培养基是微生物测定的基础，培养基的质量因而成了保证微生物实验成功的关键。培养基的制备、合理的贮存、培养基的质量检验，能确保提供持续高质量的培养基。在按照可接受的来源和标准中的配方制备培养基的过程中，重要的是选择正确的培养基和成分。与脱水和制备好的培养基一起的还常常伴有供应商的配方和说明。
微生物实验中培养基的配置应该注意的几大步骤：
1、常用玻璃仪器的准备制备培养基所用的吸管、锥形瓶、毛细吸管、平皿等玻璃仪器用前要用肥皂水洗刷后用清水冲洗干净，晾干后备用。
（1）平皿用纸或布包好，或装在金属盒内，于121℃高压蒸汽菌3min后烘干，备用。
（2）试管管口用棉花塞或硅氟塑料试管塞塞好，再用布或报纸包扎好，121℃高压蒸汽灭菌20℃后烘干，备用。
（3）吸管及滴管先用少许棉花塞于吸口端（防止污染物吸出，或橡皮帽内的气体污染），然后用纸包后或装入金属吸管筒内，于121℃高压蒸汽灭菌20min后烘干，备用。其他玻璃器皿均应按上法处理，也应装金属筒内160℃干热灭菌2h后，备用。
2、培养基的制备及储存
（1）溶化：一般应放在玻璃器皿或搪瓷齐内。加入蒸馏水，隔水加热以促其溶解，加热时应经常搅拌，防止焦结，待其溶解后补足水分。
在使用干燥培养基时，先将蒸馏水按定量加入容器中，然后称取一定量培养基干粉放入水中，静置10—15min，搅拌，振荡，或延长时间以促进溶解，一般不要热，必要时加热，但时间不宜过长，温度不宜过高，避免某些营养成分被破坏。
（2）校正酸碱度（调节pH）：培养基必须有适当的pH。因此测定pH是培养基配制过程中的重要步骤之一，测定pH的标准温度为25士2℃。调节pH可用无菌的1mol/l氢氧化钠溶液或10%碳酸钠溶液、1mol/l盐酸溶液。当调节缓冲液的pH时，宜用6mol/l磷酸或10mol/l氢氧化钾溶液。灭菌后的pH会比灭菌前的pH升高或降低，一般高压灭菌前培养基的pH会比最终pH调高0.2左右，灭菌后基本合适。因此对培养基、缓冲液、试剂在灭菌前后的pH均进行测定，并记下每次pH的测定结果，有助于积累数据考察每种培养基、缓冲液、试剂对灭菌程序的耐受性，从而指导灭菌前pH的调节。干燥培养基一般已校正过pH，用时也必须再验证。测定时，一般用指示剂滴入培养基观察其颜色的变化，或用pH计校正，如与所需pH不符，可用以上的酸或碱液加以校正。调整pH后要加热过滤，使培养基澄清。( 更多质量检测、分析测试、化学计量、标准物质相关技术资料请参考中国标准物质 www.rmhot.com)
（3）培养基的分装：大批量配制时使用的自动分配器须经校准和确认。每次使用前后，均要对分配器的管道系统进行冲洗，在分装无菌培养基前，则要采用无菌硅胶管。
固体培养基一般分装在250ml、500ml锥形瓶中，高压灭菌后根据需要分装平皿或试管。
平皿：倾注平皿，应在无菌室中放置3—4h，如用塑料平皿须在35℃培养箱 中倒置30—60min。让水蒸汽自然蒸发。
斜面：制备低层斜面分装于试管，约占容积1/5，灭菌后趁热斜放在细玻璃棒和木杆上，使成斜度，分装使注意管口和瓶塞上勿沾有培养基，如沾有培养基应用布抹去，以避免污染。
高层斜面：制备高层斜面分装于试管，约占试管容积的1/3，灭菌后趁热放置成高层短斜面，待其凝固后应用。
分装好的培养基或缓冲液等及时密封后必须在配制当天（2h内最佳）进行灭菌处理。液体、半固体培养基一般在高压灭前分装，约装试管容积的1/3，在灭菌后还要加其他成分的液体、半固体培养基，灭菌后再分装于灭菌试管或锥形瓶中。
培养基的灭菌：培养基的灭菌多采用高压蒸汽灭菌，各种培养基的灭菌时间和压力，按其成分不同而定。普通培养基采用121℃、103.42kPa灭菌15min，但容器和装量较大时，应延长至20min。含糖培养基115℃、68.85kPa灭菌30min。含糖、血清、 鸡蛋等培养基可用流动蒸汽及血清凝固器80—100℃、30min，连续3d，间歇灭菌。血清或组织液，采用低热56—58水浴1h，连续5—6d灭菌，一些遇高温即被破坏的物质如尿素、腹水等，可用细菌过滤器，过滤除菌。高压灭菌应严格按照操作规程执行，必须逐渐加热，彻底排除灭菌器内的空气，再逐渐升压保持预定的压力和时间，达到全部杀灭微生物。以上的灭菌时间和温度要经过验证确认，如不同类型培养基混合一起灭菌时宜采用115℃、68.85kPa灭菌30min为好。
通过无菌技术为测试制备的每一批培养基其PH在放冷至室温（25°）后，都应测定。一个扁平的pH计用于培养基表面pH值的测定，浸入式的pH计用于液体的测定。各供应商提供的培养基的pH应该在规定的±0.2的范围内，除非通过验证得到更宽的范围

㈤ 配制培养基的步骤

1、配制溶液

向容器内加入所需水量的一部分，按照培养基的配方，称取各种原料，依次加入使其溶解，最后补足所需水分。对蛋白胨、肉膏等物质，需加热溶解，加热过程所蒸发的水分，应在全部原料溶解后加水补足。

配制固体培养基时，先将上述已配好的液体培养基煮沸，再将称好的琼脂加入，继续加热至完全融化。并不断搅拌，以免琼脂糊底烧焦。

2、调节pH值 

用pH试纸（或pH电位计、氢离子浓度比色计）测试培养基的pH值，如不符合需要，可用10%HCl或10%NaOH进行调节，直到调节到配方要求的pH值为止。

3、过滤

用滤纸、纱布或棉花趁热将已配好的培养基过滤。用纱布过滤时，最好折叠成六层，用滤纸过滤时，可将滤纸折叠成瓦棱形，铺在漏斗上过滤。

4、分装

已过滤的培养基应进行分装。如果要制作斜面培养基，须将培养基分装于试管中。如果要制作平板培养基或液体、半固体培养基，则须将培养基分装于锥形瓶内。

分装时，一手捏松弹簧夹，使培养基流出，另一只手握住几支试管或锥形瓶，依次接取培养基。分装时，注意不要使培养基粘附管口或瓶口，以免浸湿棉塞引起杂菌污染。

装入试管的培养基量，视试管和锥形瓶的大小及需要而定。一般制作斜面培养基时，每只15×150毫米的试管，约装3～4毫升（1/4～1/3试管高度），如制作深层培养基，每只20×220毫米的试管约装12～15毫升。每只锥形瓶装入的培养基，一般以其容积的一半为宜。

5、加棉塞 

分装完毕后，需要用棉塞堵住管口或瓶口。堵棉塞的主要目的是过滤空气，避免污染。棉塞应采用普通新鲜、干燥的棉花制作，不要用脱脂棉，以免因脱脂棉吸水使棉塞无法使用。

制作棉塞时，要根据棉塞大小将棉花铺展成适当厚度，揪取手掌心大小一块，铺在左手拇指与食指圈成的圆孔中，用右手食指插入棉花中部，同时左手食指与姆指稍稍紧握，就会形成1个长棒形的棉塞。

棉塞作成后，应迅速塞入管口或瓶口中，棉塞应紧贴内壁不留缝隙，以防空气中微生物沿皱折侵入。棉塞不要过紧过松，塞好后，以手提棉塞、管、瓶不下落为合适。棉塞的2/3应在管内或瓶内，上端露出少许棉花便于拔取。塞好棉塞的试管和锥形瓶应盖上厚纸用绳捆札，准备灭菌。

6、制作斜面培养基和平板培养基

培养基灭菌后，如制作斜面培养基和平板培养基，须趁培养基未凝固时进行。

(1)制作斜面培养基。在实验台上放1支长0.5～1米左右的木条，厚度为1厘米左右。将试管头部枕在木条上，使管内培养基自然倾斜，凝固后即成斜面培养基。

(2)制作平板培养基。将刚刚灭过菌的盛有培养基的锥形瓶和培养皿放在实验台上，点燃酒精灯，右手托起锥形瓶瓶底，左手拔下棉塞，将瓶口在酒精灯上稍加灼烧，左手打开培养皿盖，右手迅速将培养基倒入培养皿中，每皿约倒入10毫升，以铺满皿底为度。

铺放培养基后放置15分钟左右，待培养基凝固后，再5个培养皿一叠，倒置过来，平放在恒温箱里，24小时后检查，如培养基未长杂菌，即可用来培养微生物。