肠激酶酶切缓冲液怎么配置

㈠ 怎么配制标准缓冲溶液

1、只要知道缓冲对的PH值，和要配制的缓冲液的pH值（及要求的缓冲液总浓度），就能按公式计算盐和酸的量。总结出pH值与缓冲液对离子用量的关系并列出了表格。只要知道要配制的缓冲液的pH，经查表便可计算出所用缓冲剂的比例和用量。

2、例如配制pH5.8浓度为0.1摩尔/升的磷酸缓冲液。

3、经查表知pH5.8浓度为0.2摩尔的Na2HPO48.0毫升，而92.0毫升的0.2摩尔Na2HPO4。依此可推论出配制100ml0.1摩尔的磷酸缓冲液需要8.0毫升0.1摩尔的Na2HPO4，而0.1摩尔的Na2HPO4需要92.0毫升。

4、计算好后，按计算结果准确称好固态化学成分，放于烧杯中，加少量蒸馏水溶解，转移入50ml容量瓶，加蒸馏水至刻度，摇匀，就能得到所需的缓冲液。

5、各种缓冲溶液的配制，均按表格按比例混合，某些试剂，必须标定配成准确浓度才能进行，如醋酸、氢氧化钠等。另外，所有缓冲溶剂的配制计量都能从以上的算式准确获得。

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缓冲体系：

一、常用作缓冲溶液的酸类由弱酸及其共轭酸盐组合成的溶液具有缓冲作用。

二、常见的缓冲体系有：

1、弱酸和它的盐（如H2CO3---Na2CO3）

2、弱碱和它的盐（NH3·H2O---NH4Cl）

3、多元弱酸的酸式盐及其对应的次级盐（如NaH2PO4---Na2HPO4）的水溶液组成。

三、生化实验室常用的缓冲系主要有磷酸、柠檬酸、碳酸、醋酸、巴比妥酸、Tris（三羟甲基氨基甲烷）等系统，生化实验或研究工作中要慎重地选择缓冲体系，因为有时影响实验结果的因素并不是缓冲液的pH值，而是缓冲液中的某种离子。

1、硼酸盐：硼酸盐与许多化合物形成复盐、如蔗糖。

2、柠檬酸盐：柠檬酸盐离子容易与钙结合，所以存在有钙离子的情况下不能使用。

3、磷酸盐：在有些实验，它是酶的抑止剂或甚至是一个代谢物，重金属易以磷酸盐的形式从溶液中沉淀出来。而且它在pH7.5以上时缓冲能力很小。

4、三羟甲基氨基甲烷：它可以和重金属一起作用，但在有些系统中也起抑制作用。其主要缺点时温度效应。在室温pH是7.8的Tris缓冲液，4℃时是8.4，37℃时是7.4，因此，4℃配制的缓冲液在37℃进行测量时，其氢离子浓度就增加了10倍。在pH7.5以下，其缓冲能力极为不理想。

㈡ 要配置多少的酶切体系，载体和插入DNA的量要加多少谢谢各位啦！！

因为内切酶的酶活性单位定义是在50ul反应体系中，最适温度反应1小时能够讲1ugDNA完全酶切的酶量。所以，一般在酶切体系里，DNA的量是可以加到非常大的。因为考虑到后期的纯化后DNA的损失问题，所以推荐酶切体系中的DNA尽量多加一些。这样你纯化回收后的DNA剩下的就比较多，有利于后期的连接以及筛选。具体的话，我经常做的就是50ul体系中除了buffer和酶以外，其他的成份全部都是载体或者插入片段的溶液。当然，你得保证你的DNA浓度约可以达到50ng/ul左右的浓度。最后，做连接的时候一定要注意插入片段和载体的摩尔比，理想状态下应该是3-10比1。

㈢ 胃蛋白酶、胰蛋白酶处理样品时需要什么样的缓冲液啊终浓度和工作条件是什么啊

胰蛋白酶工作条件为37度，PH8.5的微碱性环境，缓冲液使用25mM的碳酸氢铵即可，终浓度为0.01ug/ul

㈣ 两种酶的反应缓冲液不一样，做双酶切时如何处理

如果是分开酶切的话，第一个酶切完成后要回收（可用醇回收，效率比较高）后，再进行第二次酶切。

做转化的时候，进行酶连接反应时，注意保持低温状态，因为LIGASE酶很容易降解。为保险起见，一般连接3小时，16度；对含有AMP-RESISTENCE的质粒铺板时，注意加AMP时的温度，温度过高，会使克隆株无法筛选出来。

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由于内切酶在非最佳缓冲液条件下的切割速率会减缓，因此使用时可根据每种酶在非最优缓冲液中的具体活性相应调整酶量和反应时间。

在大多数情况下，采用标准缓冲液的酶也能在这些特殊缓冲液中进行酶切。这保证了对缓冲液有特殊要求的酶也能良好工作。

由于内切酶在非最佳缓冲液中进行酶切反应时，反应速度会减缓，因此需要增加酶量或延长反应时间。

㈤ 激酶反应缓冲液

10×是指需要稀释10倍使用.
如10×激酶缓冲溶液2.5ml,必须被稀释成25ml才能使用（稀释剂是什么无所谓,一般只要是水溶液就行）

㈥ 1mol/l的tris-Hcl怎么配置

用1mol的tris溶于900ml水中，因为tris是碱性，用hcl调ph，最终定容到1000ml。

Tris三羟甲基氨基甲烷，三羟甲基氨基甲烷是一种有机化合物，其分子式为(HOCH2)3CNH2。Tris被广泛应用于生物化学和分子生物学实验中。Tris-HCl是实验室最常用的一种缓冲液，pH值随温度的变化而变化。通常来说温度每上升1℃，pH值下降0.03。如无特殊说明，所调折算为25℃时的pH值。

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注意事项：

1、对人体有刺激性，请注意适当防护。 

2、 为了安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

3、为了保证缓冲溶液有足够强的缓冲能力，在配制缓冲溶液时，需要做到为使共轭酸碱对的浓度比接近于1，应根据所需要维持的pH范围选择合适的缓冲对，使弱酸的PKa等于或接近于所要求的pH。

4、应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

参考资料来源：网络-Tris-HCl

参考资料来源：网络-配置

参考资料来源：网络-配制溶液

㈦ 双酶切酶切体系和buffer怎么设计比较合适

体系不管多大，都有相应的buffer，只要将buffer变为1X工作浓度就行了，两个同时切的话，需要注意酶的量，看单位是多少，一般是1ul的酶切1ug的质粒或者其它DNA序列，尽量酶的体积不能超过体系的10%，因为里面含有甘油，可能会影响酶切效率。

㈧ 酶切体系对质粒DNA浓度、缓冲液、酶量有什么要求

这个是看你用什么酶，一般购买的时候都会配有缓冲液和推荐用量的。质粒的浓度不要过高就行。如果没有完全切开，可以延长酶切的时间。

㈨ 酶反应缓冲液怎么配

这上面的浓度都是终浓度。如果你配的量比较小，比如只有10ml，如果直接计算称量的话，可能误差很大。你可以将每一种单独配成浓缩液，如1M Tris-HCl，再加入十分之一（配10ml加入1ml）。DTT也可以配成1M的，加入两百分之一体积，最后用水补足体积。混匀就是。其他的几个也可以这样配。而且这种缓冲液也有一个PH值。你可以用1M Tris-HCl来控制。其他的PH值不用管。

㈩ 酶和底物溶液为什么要用缓冲液配制

缓冲液 1）缓冲溶液作用原理pH值
往某些溶液加入定量酸碱,阻碍溶液pH变化作用,称缓冲作用,溶液叫做缓冲溶液.弱酸及其盐混合溶液（HAc与NaAc）,弱碱及其盐混合溶液（NH3·H2O与NH4Cl）等都缓冲溶液.
由弱酸HA及其盐NaA所组缓冲溶液酸缓冲作用,由于溶液存足够量碱A-缘故.向种溶液加入定量强酸,H 离基本A-离消耗：
所溶液pH值几乎变；加入定量强碱,溶液存弱酸HA消耗OH-离阻碍pH变化.