桿菌存儲劑

『壹』 —20度保存菌種，細菌能存活多久

要看保存液是什麼，也要看細菌本身特性，我了解的如果用一般的腸桿菌存儲液保存，至少腦膜炎奈瑟菌就不行，基本上幾天就很容易大量死亡

『貳』 保存菌種需用不同ph值的菌液嗎

保存菌種不需用不同ph值的菌液。

保存菌種的方法：
1.定期移植法
將菌種接種於所要求的培養基上﹐在最適溫度中培養﹐至靜止期或產生成熟的孢子時﹐置入 5℃的冰箱(或冰庫)保存。在培養和保存的過程中﹐由於代謝產物的累積而改變了原菌的生活條件﹐結果菌落群體中的個體就不斷衰老和死亡﹐因此每5～15天或 1～4個月重新移植一次﹐具體間隔時間因種而異。凡能人工培養的微生物都可用此法保存。此法不需特殊設備﹐但煩瑣﹐費時﹐而且經常移植容易引起菌種退化。

2.礦油封藏法
將化學純的液體石蠟(礦油)經高壓蒸氣滅菌﹐放在40℃恆溫箱中蒸發其中的水分﹐然後注入斜面培養物中﹐使液面高出斜面約 1厘米。將試管直立﹐放在15～20℃室溫中保存。由於在斜面培養物上覆蓋一層液體﹐既能隔絕空氣﹐又能防止培養基因水分蒸發而乾燥﹐可以延長菌種保藏的時間。但注入的液體必須不與培養基混溶﹑對菌種無毒﹐不易被利用和揮發。此法適用於酵母菌﹑芽孢桿菌﹔不適用於固氮菌﹑乳酸桿菌﹑明串珠菌﹑法門氏菌和毛黴目中的大多數屬種。此法簡便易行﹐但必須注意防火和污染。

3.沙土管法
將沙或土過篩﹑烘乾﹑裝管﹑滅菌﹑然後將菌種製成孢子懸液滴入其中混勻﹐放到盛氯化鈣的乾燥器里吸除水分﹐乾燥後保存或用火焰封管後保存。吸附在乾燥沙土上的孢子因缺水而處於休眠狀態﹐可保存較長時期。此法適用於芽孢桿菌﹑梭狀芽孢桿菌﹑放線菌﹑鐮刀菌等。

4.麩皮法
將麩皮製成培養基﹐培養要保存的菌種﹐待生長良好後﹐置乾燥器中保存。這是根據中國釀造酒﹑醋﹑醬時制麴的經驗所採用的一種保藏方法﹐適用於穀物微生物區系中的種類。

5.L－乾燥法
又稱液體乾燥法或真空乾燥法﹐用含3%谷氨酸鈉的0．1M磷酸緩沖溶液 (pH7.0)做分散媒﹐將待保藏的微生物製成高濃度的細胞懸液﹐滴入無菌安瓿瓶中﹐每管0.05毫升﹔將安瓿瓶固定在多歧管上﹐並以水浴保持安瓿瓶內樣品溫度為10℃﹐在 13.3～1.3帕的真空度下乾燥﹐火焰封管保存。此法不經凍結﹐用真實泵迅速抽乾﹐可避免菌種的凍傷或死亡。廣泛應用於病毒﹑噬菌體﹑細菌﹑酵母菌﹑藍藻﹑原生動物等。

6.梭氏法
將容有 1滴細胞懸液的小管﹐置於盛有氫氧化鉀或五氧化二磷吸水劑的大試管中﹐用真空泵抽至1.3帕時﹐將大試管密封保存。這是為減少細胞死亡率而採取的一種不經凍結﹑緩慢脫水的乾燥保藏法﹐適用於多種細菌﹑真菌。

7.冷凍真空乾燥法
將細胞懸液每0.1～0.2毫升注入一無菌安瓿瓶﹐於-40℃預凍1小時﹐再於-20～30℃﹑真空度為13.3帕的條件下脫水。在脫水過程後期﹐安瓿瓶外溫度可逐漸升至25℃。脫水後的樣品含水量應在 3%以下。最後﹐將安瓿瓶保持真空度 1.3帕﹐用火焰溶封﹐置10℃保存。為防止細胞在凍結和脫水過程中損傷或死亡﹐要用保護劑制備細胞懸液。保護劑有脫脂牛奶﹑血清﹑10%蔗糖或葡萄糖溶液等﹐其作用是通過氧和離子鍵對水和細胞所產生的親合力來穩定細胞成分的構型。此法適用於病毒﹑衣原體﹑枝原體﹑細菌﹑放線菌﹑酵母菌﹑絲狀真菌等的長期保存﹐是當前保藏菌種的一個重要方法。但是﹐鹽桿菌﹑發光桿菌﹑黏桿菌﹑阿舒囊黴﹑多囊黴﹑擔子菌中的大多數屬種不適用於此法保存。

8.液態氮超低溫凍結法
用甘油或二甲亞(DMSO)作保護劑制備細胞懸液﹐分裝入無菌安瓿瓶﹐每管0.2毫升﹐在控制溫度下降速率為1℃/分鍾的條件下預凍至-40℃﹐然後立即放入液氮生物貯存罐中氣相(-150℃)保存。恢復培養時﹐先直接侵入38℃水浴中解凍 5～10分鍾﹐再種植於適宜培養基內培養。這是根據在低於-130℃時一切生化反應處於停止狀態﹑微生物也不能進行代謝活動而設計的凍結法。為避免凍死﹑凍傷和細胞內形成大量冰晶﹐用保護劑制備懸液並控制預凍時的冷卻速率和解凍時融化速率。微生物的大多數屬種適於慢速凍結和快速解凍。此法適用於病毒﹑枝原體﹑各種細菌﹑放線菌﹑酵母菌﹑絲狀真菌﹑藍藻等。

『叄』 甘油法低溫保藏大腸桿菌

。。。
甘油和水是任意比混溶的。
不是甘油和種子液1:1，這個只是某個方法而已，重要的是甘油量要在20-50%之間不等，看你凍在多少度的冰箱里了。

但這個畢竟是短期的保藏方法， 你要保藏得久一點，或者再短一點，液氮、乾燥、平板等等都是可以用來保藏大腸桿菌的，只是甘油法比較常用。

『肆』 雙歧桿菌類的葯物的儲存是不是要放在冰箱里

膠囊類常溫保存就可以.
針劑/液體最好是4攝氏度保存.

『伍』 大腸桿菌保存

以實驗室要求來說，斜面培養基上的菌，還有菌液，都不是保存菌株的方法，那都是培養、擴增菌株用的，在4度放著，幾天就不行了。

要保存菌株，應該採取甘油管的方式：取出一點發酵得到的菌液，按3:1加入甘油，攪勻，液氮速凍，然後放入-70度超低溫冰箱，可保2年活力，需要使用時，冰上解凍，沾一點加到新培養基里活化培養。

如果你是想保存一大瓶菌液，比如說今天培養了一瓶或者一管，想放到冰箱等想用的時候再用……那我告訴你快算了吧，菌液只能現培養現用，細菌也是活的，怎麼都放不住的，只能存個種，需要的時候再培養。

回答你的補充：原則上是現養現用，如果你實在懶，那可以把菌液放在4度冰箱，能用個1,2天。

『陸』 大腸菌群的保存方法

一．菌種的保存
重組 DNA 分子(質粒、噬菌體、粘性質粒)必須導入宿主菌中，通過細菌培養來擴增所需的重組 DNA。
通常採用宿主菌是大腸桿菌，根據不同載體需求，選用不同品系大腸桿菌
1. 概述：大腸桿菌其它微生物一樣，都具有穩定遺傳性和變異性、遺傳性，保證微生物本身特徵的相對穩定，即無性繁殖過程中能夠保持原有的性狀，為菌種保藏提供了有利因此，而變異性，使微生物的性狀在繁殖過程中出現某些改變，給菌種保藏帶來了困難。由於存在變異，即菌種常出現所謂的退化，主要指理想性狀的喪失，從而導致發育緩慢，存活率和產質量降低等現象，菌種保藏工作就是使菌種的變異降低至最小水平，使菌種在較長期的保藏之後仍然保持著原有的生命力、優良生產性能、形態特徵以及不污染雜菌。能夠長期在研究上應用。
2. 微生物的變異速度，通常情況下，與其新陳代謝速度有關，微生物代謝活力旺盛，它的變異速度快，代謝活動微弱，變異速度就慢。並且在多次的無性繁殖過程中可能會有突變的積累。人們利用這一規律，可以創造各種條件，使微生物活動處於微弱活動或不活動狀態，以減少變異的發生。
3. 菌種保藏的原理是：通過低溫、乾燥、隔絕空氣和斷絕營養等手段，以達最大限度地降低菌種的代謝強度，抑制細菌的生長和繁殖。由於菌種的代謝相對靜止，生命活動將處休眠狀態，從而可以保藏較長時間。要求保存的菌種在復甦後除保持以前的生活與繁殖能力、不發生形態特徵、生理狀態及遺傳性狀的
改變外，還不允許污染任何雜菌。此外，在保存前應確保菌種的單純性，先分離單菌落後進行鑒定，然後再繁殖保存。
4. 常用的長期保存法有：液體石蠟法、硅膠保存法、加入甘油或二甲基亞碸（DMSD）等保護劑。
5. 甘油低溫保存法(－70℃—－196℃)的特點
i.
甘油菌低溫保存的基本原理是：在-70℃或液氮中凍存，細菌內的酶活性均己停止，即代謝處於完全停止狀態，故可以長期保存。在0℃—-70℃溫度范圍內，水晶呈針狀，極易招致細菌的嚴重損傷。用電鏡觀察，可見細菌的核膜上有大量針尖樣小孔。因此，為了避免0℃—-70℃冰晶的形成和細菌膜兩側離子平衡的破壞，需要加保護劑。甘油可降低冰點，在緩慢的凍結條件下，能使細菌內水分在凍結前透出細菌外。貯存在-70℃以下低溫中能減少冰晶形成，甘油對細菌無毒性，分子量小，溶解度大，易穿透細菌.
ii.
使用濃度范圍為15%-50%，一般常用30%。在保存瓶中按1：1加入60%的甘油和菌液，混勻後貯存於-70℃或液氮中。復甦後細菌仍能生長，活力不受任何影響。
二、菌種的復甦
復甦菌種時，用接種環或牙簽挑取少許凍結的菌種到平皿上，37℃培養8-12小時即可。甘油菌從冰箱取出使用時應置於低溫或 0℃冰浴中，用完盡快放回，接種時挑取表面已融化部分即可，不可全溶，因反復凍融會導致細胞壁破裂。
切記：接種過程中不得使保存瓶中的菌液融化。
三、大腸桿菌培養
1.培養基配製：培養基從形態上分為液體與固體培養基。根據有無抗生素和其他選擇性葯物分為普通與選擇培養基，常用LB培養基。
1）LB（Luria-Bertain)液體培養基配製
精解蛋白腖(bacto-tryptone)1.0%
酵母浸出粉(bacto-extract)0.5%
氯化鈉1.0%
攪拌使之完全溶解，用5molNaOH(about0.2ml/1000ml培養基）調pH至7.0，如用進口試劑可不
必調， 高壓滅菌20min(120℃ 0.1Mpa)
2）含瓊脂的固體培養基配製
（1）普通培養基:固體培養基是在液體培養基中加 1.5%瓊脂製成，先配液體培養基，然後加入 1.5%瓊脂，高壓滅菌20min，取出後再無菌狀態下鋪平板
（2）選擇性培養基:將消毒好的固體培養基置室溫下冷卻50℃時加抗生素或其他必加成分，搖勻後倒入滅菌皿中厚度2-3mm, 室溫固化。 (抗生素用三蒸水溶解後，用無菌濾頭過濾到無菌瓶中, 氨苄青黴素終濃度 50μl/ml)新制備的固體培養基較濕，鋪上的液體不易吸收，可在室溫下放 2-3天，或37℃放半小時，然後4℃保存備用。
（3）LB培養基中所用抗生素終濃度：氨苄青黴素-50μl/ml；氯黴素-20μl/ml；慶大黴素-15μl/ml；卡那黴素-30μl/ml；春日黴素-1000μl/ml；壯觀黴素-100μl/ml；鏈黴素-30μl/ml；四環素-12μl/ml。
注意：除了四環素保存-20℃，其餘均應保存4℃，所有抗生素均應溶於無菌去離子水。四環素對光敏感
2.液體細菌培養
1）小量培養:
(1) 取滅菌 16 或 18mm 口徑培養管，加 3-5mlLB 培養基，再加 50mg/ml 氨苄青黴素 3-5ul（宿主菌不加抗生素）
(2) 無菌牙簽挑取單菌落，送入培養液中，或取菌液 5-10ul，轉入培養液中，封好管口
(3) 37℃搖床培養 100-200r/min 至生長飽和，約 6-12 小時
2）大量培養:取 500ml 培養瓶內裝培養基 100-200ml，及相應抗生素。以 0.5-1%濃度接種菌液，37 度搖床培養100-200r/min至OD值0.6-0.8。
3.固體細菌培養: 用於單一菌落的挑選，轉化後抗性菌落的篩選。
方法：採用劃痕接種法。用接種環從菌種中沾取少量菌液，劃線。

『柒』 乳酸菌怎麼保存可以存放多長時間

乳酸菌指發酵糖類主要產物為乳酸的一類無芽孢、革蘭氏染色陽性細菌的總稱。為原核生物。乳酸菌是一類能利用可發酵碳水化合物產生大量乳酸的細菌的通稱。這類細菌在自然界分布極為廣泛，具有豐富的物種多樣性。它們不僅是研究分類、生化、遺傳、分子生物學和基因工程的理想材料，在理論上具有重要的學術價值，而且在工業、農牧業、食品和醫葯等與人類生活密切相關的重要領域應用價值也極高。此外，這類菌中有些細菌又是人畜的致病菌，因此受到人們極大的關注和重視。
活性乳酸菌飲料必須在冷藏的條件下運輸、銷售和儲存，否則在很短的時間內，裡面的活性菌就會大量死亡，從而失去保健功能，甚至可能變成有害無益。
乳酸菌可以在常溫下保存並保持活性，但是時間短，例如川秀乳酸菌經過30天的常溫保存後，仍然可以正常使用，但是乳酸菌活性出現下降，酸奶發酵時間有可能被延長，但不影響發酵質量。 一般用添加保護劑的冷凍乾燥保存效果好。
1、活性乳酸菌飲料由於含有大量、豐富的活性有益菌，而成為具有保健功能的時尚飲料，備受消費者歡迎。但是，日前，記者走訪廣州各大超市、商場時，發現很多品牌的活性乳酸菌飲料直接就擺放在貨架上、在常溫狀態下銷售。昨日，有關食品專家對此擔心地表示，活性乳酸菌飲料必須在冷藏的條件下運輸、銷售和儲存，否則在很短的時間內，裡面的活性菌就會大量死亡，從而失去保健功能，甚至可能變成有害無益。
2、活性乳酸菌飲料能否在常溫下儲存、銷售？「活性菌」到底保持多長時間的活性？活菌的數量達到多少才是有益人體？ 按照目前乳酸飲料國家標准，活性乳酸菌飲料應儲存在2℃－10℃，保存期不少於1個月。據介紹，活性乳酸菌飲料在生產時一般不需要經過高溫殺菌，所以在出廠後要冷藏銷售、運輸和儲存，不能常溫下存放。因為，在低溫的狀態下，活性菌活動可受到抑制，否則將會很快大量死亡。同時，也可抑制大腸桿菌、黴菌等細菌繁殖。「像這類食品，最好還是低溫保存。」有關專家認為，最標準的儲存溫度是家庭冰箱里的4℃－5℃。
3、在常溫狀態下，保質期長達6個月、9個月是根本不可能的，放一周左右影響不大，但一周後活性乳酸菌數量就會迅速減少。即使可能保存到一個月，保留在飲料里的活菌量又有多少？據專家介紹，活性乳酸菌具有改善胃腸道功能(調節腸道菌群、促進消化)的功能，這種活性乳酸菌飲料本身是沒有營養的，其蛋白質含量只有1％左右，消費者消費它的主要原因是看中它的保健功能，而活性乳酸菌也只有保持一定數量才能起到調節作用，若沒有活菌或活菌量少，就沒有任何作用了。華南理工大學輕工與食品學院副院長趙謀明還表示，在一般的冷藏條件下(約4℃)，一個月後活性乳酸菌的數量將會大量遞減，存活下來的數量將會很少。而在常溫下這一情況將更嚴重，兩個月還存留的活菌數量更是非常少。
具有活性的乳酸菌飲料，按要求，每毫升活性乳中活乳酸菌的數量不應少於100萬個。當人們飲用了這種飲料後，乳酸菌便沿著消化道進入到大腸，由於它具有活性，乳酸菌在人體的大腸內迅速繁殖，同時產酸，它的代謝產物可以降解食物大分子,使小分子進一步細化,更利於人體的消化和吸收.此外還有效地抑制腐敗菌和致病菌的繁殖和成活。這種飲料要求在2~10℃下冷藏貯存和銷售.在低溫條件下,保證了飲品的質量和口感問題.密封包裝的活性乳保質期為15天。活性乳酸菌飲品室溫保存，第 3天活菌數為 107cfu/ml;第 7天活菌數剛剛達到 106 cfu/ml，到了第 10 天就降到了105cfu/ml;每隔3～4天下降一個數量級，而且酸度迅速上升。室溫保藏活性乳酸菌飲品，由於溫度較高，適合於很多細菌生長，一些易染雜菌繁殖較快，可能會導致飲品的變質，隨著保存時間的加長，產品組織狀態也會發生變化，有乳清析出，粘度下降，口感不細膩，味道過酸，從而影響了質量。
按照目前乳酸飲料國家標准，活性乳酸菌飲料應儲存在2℃－10℃，保存期不少於1個月。活性乳酸菌飲料在生產時一般不需要經過高溫殺菌，所以在出廠後要冷藏銷售、運輸和儲存，不能常溫下存放。因為，在低溫的狀態下，活性菌活動可受到抑制，否則將會很快大量死亡。同時，也可抑制大腸桿菌、黴菌等細菌繁殖。像這類食品，最好還是低溫保存，最標準的儲存溫度是家庭冰箱里的4℃－5℃。
如果是乳酸菌飲料，室溫保存可以3-5天，時間不宜太長，如果是其他乳酸菌食品，建議冰箱4-5度保存，乳酸菌不宜在室溫下保存。如果單單是為了使該菌存活，也最好不要室溫保存，因為過了指數生長期後，會漸漸衰老！
有關食品專家對此擔心地表示，活性乳酸菌飲料必須在冷藏的條件下運輸、銷售和儲存，否則在很短的時間內，裡面的活性菌就會大量死亡，從而失去保健功能，甚至可能變成有害無益。
乳酸菌在常溫下只能短時間保存，否則可能變質或活性下降，還是建議低溫保存比較好。
活性乳酸菌飲料由於含有大量、豐富的活性有益菌，而成為具有保健功能的時尚飲料，備受消費者歡迎。但是，日前，記者走訪廣州各大超市、商場時，發現很多品牌的活性乳酸菌飲料直接就擺放在貨架上、在常溫狀態下銷售。昨日，有關食品專家對此擔心地表示，活性乳酸菌飲料必須在冷藏的條件下運輸、銷售和儲存，否則在很短的時間內，裡面的活性菌就會大量死亡，從而失去保健功能，甚至可能變成有害無益。
華南理工大學食品科學與工程系主任曾慶孝教授在接受記者采訪時表示，按照目前乳酸飲料國家標准，活性乳酸菌飲料應儲存在2℃－10℃，保存期不少於1 個月。據介紹，活性乳酸菌飲料在生產時一般不需要經過高溫殺菌，所以在出廠後要冷藏銷售、運輸和儲存，不能常溫下存放。因為，在低溫的狀態下，活性菌活動可受到抑制，否則將會很快大量死亡。同時，也可抑制大腸桿菌、黴菌等細菌繁殖。「像這類食品，最好還是低溫保存。」有關專家認為，最標準的儲存溫度是家庭冰箱里的4℃－5℃。

『捌』 大腸桿菌與黑麴黴分別採用什麼保藏方法為好,為什麼

大腸桿菌適宜冷凍保藏，有條件的話按比例加入甘油做保護劑在－70℃低溫冰箱保存，也可以在－30～－20℃普通冰箱