如何配置不同激素濃度的培養基
Ⅰ 配置培養基的原則有哪些
還是很多的。
培養基配製應遵循的原則
1、 根據不同微生物的營養需要配製不同的培養基。
2、 注意各種營養物質的濃度及合適配比,保持合適滲透壓 。
3、 將培養基的 pH 控制在適宜的范圍之內,以利於不同類型微生物的生長繁殖或代謝產物的積累。
4、 經濟節約的原則。在所選培養基成分能滿足微生物培養要求的前提下,盡可能選用價格低廉,資源豐富的材料作培養基成分。
5、控制氧化還原電位。對厭氧的微生物尤其重要。
6、培養基應無菌。故在培養基配製後應徹底殺死培養基中的雜菌 。
Ⅱ 關於配製植物組織培養所用的MS培養基中激素量的問題。
6-BA要加0.1毫克;
NAA要加0.3毫克。
解:因為1000毫升=1升
而6-BA每升要用0.1毫克
NAA每升要用0.3毫克
1*0.1=0.1(毫克)
1*0.3=0.3(毫克)
所以6-BA用0.1毫克;
NAA用0.3毫克。
Ⅲ 現在需要1.2mg/L的激素KT用於組織培養,我想配50ml,怎麼配置呢然後配置1L的培養基時吸取多少呢
你好!
配置50ml需要激素KT0.06mg,配置1L的培養基時要看你配方里激素的用量才可以確定吸取多少。
打字不易,採納哦!
Ⅳ 怎樣配製不同濃度的高糖培養基
怎樣配製不同濃度的高糖培養基
先配置一個高濃度的高糖培養基,
然後顧慮後按比例配置
Ⅳ 培養基中激素的種類及其濃度配比為什麼能夠決定產生花葯植株的兩種途徑
因為具體來講生長素和細胞分裂素的作用機理不同。書本上生長素類似物促進插條生根的實驗。所以生長素多,生根多。
Ⅵ 培養基激素種類和濃度如何確定
可以參照相同物種或相似物種的組織培養用的激素,如果沒有的話就只能設計梯度正交試驗進行確定了!
Ⅶ 關於配製MS培養基中激素濃度換算的問題
1mg/ml是1mg/L的一千倍,所以配1000ml加1ml母液就對了,稀釋一千倍。
Ⅷ 植物組織培養中激素濃度和相對比例如何確定
組織培養中對培養物影響最大的是外源激素。在基本培養基確定之後,實驗中要大量進行的工作是用不同種類的激素進行濃度和各種激素間相互比例的配合試驗。在實驗中,首先應參考已有的報道,看是否有用相同植物、相同組織或相近者做過成功或失敗的試驗,如果有
則可直接作為參考;如果沒有,則在建立激素配比中,將每一種擬使用的激素選擇3~5個水平,再按隨機組合的方式建立起如下的實驗辦案。
這樣就設計出了16種激素配比的實驗方案,即16種不同的培養基。用這16種培養基進
行初試之後,你會找到1種或幾種是比較好的。再在這些比較好的組合的基礎上進行小范圍
的調整,設計出一組新的配方。如在表1-2中,認為6號培養基較有希望,就可以在此基礎上
做出如表1-3的一組新的設計。
一般來說,經過這次實驗就可能選出一種適合你的實驗材料的培養基,或許不是最好的,但結果是可靠的。在此基礎上可進行培養基中其他成分的變動實驗,如可變動蔗糖濃度、
瓊脂用量、培養基的pH值或添加某些氨基酸等。但必須掌握一個原則,就是要有理有據,特別是對一些寶貴的植物培養材料,更要慎之又慎。
如果上述試驗失敗,那就要做一些更細致、更麻煩的實驗,花費更多時間、人力和物力,而且最好在專業人員的指導下進行,切莫根據想像來隨意設計培養基,這樣成功的概率極小,使寶貴的植物材料丟失或失去時機。
以上僅供參考,具體看你做什麼材料,歡迎追問,滿意請採納,謝謝!!
Ⅸ 怎樣配製母液和培養基
配製培養基是花卉組織培養的首要環節。培養基的成分隨著花卉的種類、不同的外植體、不同的培養階段應當有所不同。一般來說,各種培養基都有大量元素、微量元素、維生素、激素、糖和瓊脂等物質,有時還要在培養基里添加有機附加物,如活性炭、香蕉汁、椰子汁等。在生產上,首先選用已有的培養基配方,它是前人研究的成果,又是經過生產實踐驗證的。現在幾乎各種花卉用的營養基配方都有,可以免去您再研究的麻煩,當然在生產實踐中,也可適當改進。如果您找不到合適的配方,可先試用MS培養基,MS是Murashige和Skoog的縮寫,他們二人於1962年研究出來了這種培養基。下面以MS培養基為例,介紹怎樣配製。
(1)配製母液。把培養基中的必需元素按原配方量的50倍、100倍或1000倍稱量後製成一種濃溶液,這種濃溶液叫母液。在配製培養基時按比例分別量取母液稀釋到所需的濃度即可。母液配好後貼上標簽,放在0~4℃的冰箱中,可使用半年到1年,這樣做可節省許多時間。可能產生化學反應的或溶解後產生沉澱的,不能放在同一個容器中。配製母液要用重蒸餾水。葯物要使用分析純或等級較高的化學純。葯物的稱量和葯液的定容都要准確。
母液①:硫酸鎂18.5克,硝酸銨82.5克,硝酸鉀95.0克。加水定容到1000毫升,濃度為培養基的50倍,配1升培養基時量取20毫升母液。
母液②:氯化鈣22.0克。加水定容到500毫升,濃度為培養基的100倍,配1升培養基時量取10毫升母液。
母液③:磷酸二氫鉀8.5克。加水定容到500毫升,濃度為培養基的100倍,配1升培養基時量取10毫升母液。
母液④:乙二胺四乙酸二鈉3.73克,硫酸亞鐵2.78克。加水定容到1000毫升,濃度為培養基的100倍,配1升培養基時量取10毫升母液。
母液⑤:硼酸620毫克,硫酸錳2230毫克,硫酸鋅860毫克,硫酸銅2.5毫克,碘化鉀83毫克,鉬酸鈉25毫克,氯化鈷2.5毫克。加水定容到1000毫升,濃度為培養基的100倍,配1升培養基時量取10毫升母液。
母液⑥:肌醇5克,甘氨酸100毫克,煙酸25毫克,鹽酸吡哆醇25毫克,鹽酸硫胺素5毫克。加水定容到500毫升,濃度為培養基的100倍,配1升培養基時量取10毫升母液。
(2)配製培養基。配製每1000毫升培養基,稱取6~10克瓊脂作凝固劑,具體按配方要求稱量,放在水浴鍋上慢慢溶解。先在量筒內放入一定量的水,按照母液順序和規定量,量取母液。當母液加完後,根據需要每升培養基再加入生長調節物質如吲哚乙酸或萘乙酸等,細胞分裂素類0.04~10毫克,細胞分裂素應用最多的是6-苄基腺嘌呤,加完後倒入已熔化的瓊脂中。每1000毫升培養基加入蔗糖30克或根據要求確定,定容到所需的體積。繼續加溫,直到瓊脂完全熔解。用鹽酸或氫氧化鈉對培養基的pH進行調節,多數培養基的pH在5.4~6.0之間,MS培養基的pH為5.7。
將配好的培養基趁熱倒入培養容器中,培養基占容器體積的1/3~1/4。不要將培養基沾到容器壁上,否則容易被雜菌感染。然後及時加蓋,進行高壓滅菌,滅菌時要按高壓滅菌鍋的操作規程使用。在121℃、壓力111千帕下維持15~20分鍾,溫度和時間都要嚴格控制。到時間後立即切斷電源,當高壓鍋內壓力降到常壓後,開啟放氣閥,打開鍋蓋,取出滅菌好的培養基,放在接種室中培養3天,沒被感染後才能用來組織培養。
Ⅹ 配置培養基的基本步驟有哪些應注意什麼問題
培養基的配置應該注意的幾大步驟:
1、常用玻璃儀器的准備制備培養基所用的吸管、錐形瓶、毛細吸管、平皿等玻璃儀器用前要用肥皂水洗刷後用清水沖洗干凈,晾乾後備用。
(1)平皿用紙或布包好,或裝在金屬盒內,於121℃高壓蒸汽菌3min後烘乾,備用。
(2)試管管口用棉花塞或硅氟塑料試管塞塞好,再用布或報紙包紮好,121℃高壓蒸汽滅菌20℃後烘乾,備用。
(3)吸管及滴管先用少許棉花塞於吸口端(防止污染物吸出,或橡皮帽內的氣體污染),然後用紙包後或裝入金屬吸管筒內,於121℃高壓蒸汽滅菌20min後烘乾,備用。其他玻璃器皿均應按上法處理,也應裝金屬筒內160℃乾熱滅菌2h後,備用。
2、培養基的制備及儲存
(1)溶化:一般應放在玻璃器皿或搪瓷齊內。加入蒸餾水,隔水加熱以促其溶解,加熱時應經常攪拌,防止焦結,待其溶解後補足水分。
在使用乾燥培養基時,先將蒸餾水按定量加入容器中,然後稱取一定量培養基乾粉放入水中,靜置10—15min,攪拌,振盪,或延長時間以促進溶解,一般不要熱,必要時加熱,但時間不宜過長,溫度不宜過高,避免某些營養成分被破壞。
(2)校正酸鹼度(調節pH):培養基必須有適當的pH。因此測定pH是培養基配製過程中的重要步驟之一,測定pH的標准溫度為25士2℃。調節pH可用無菌的1mol/l氫氧化鈉溶液或10%碳酸鈉溶液、1mol/l鹽酸溶液。當調節緩沖液的pH時,宜用6mol/l磷酸或10mol/l氫氧化鉀溶液。滅菌後的pH會比滅菌前的pH升高或降低,一般高壓滅菌前培養基的pH會比最終pH調高0.2左右,滅菌後基本合適。因此對培養基、緩沖液、試劑在滅菌前後的pH均進行測定,並記下每次pH的測定結果,有助於積累數據考察每種培養基、緩沖液、試劑對滅菌程序的耐受性,從而指導滅菌前pH的調節。乾燥培養基一般已校正過pH,用時也必須再驗證。測定時,一般用指示劑滴入培養基觀察其顏色的變化,或用pH計校正,如與所需pH不符,可用以上的酸或鹼液加以校正。調整pH後要加熱過濾,使培養基澄清。( 更多質量檢測、分析測試、化學計量、標准物質相關技術資料請參考中國標准物質 www.rmhot.com)
(3)培養基的分裝:大批量配製時使用的自動分配器須經校準和確認。每次使用前後,均要對分配器的管道系統進行沖洗,在分裝無菌培養基前,則要採用無菌硅膠管。
固體培養基一般分裝在250ml、500ml錐形瓶中,高壓滅菌後根據需要分裝平皿或試管。
平皿:傾注平皿,應在無菌室中放置3—4h,如用塑料平皿須在35℃培養箱 中倒置30—60min。讓水蒸汽自然蒸發。
斜面:制備低層斜面分裝於試管,約占容積1/5,滅菌後趁熱斜放在細玻璃棒和木桿上,使成斜度,分裝使注意管口和瓶塞上勿沾有培養基,如沾有培養基應用布抹去,以避免污染。
高層斜面:制備高層斜面分裝於試管,約占試管容積的1/3,滅菌後趁熱放置成高層短斜面,待其凝固後應用。
分裝好的培養基或緩沖液等及時密封後必須在配製當天(2h內最佳)進行滅菌處理。液體、半固體培養基一般在高壓滅前分裝,約裝試管容積的1/3,在滅菌後還要加其他成分的液體、半固體培養基,滅菌後再分裝於滅菌試管或錐形瓶中。
培養基的滅菌:培養基的滅菌多採用高壓蒸汽滅菌,各種培養基的滅菌時間和壓力,按其成分不同而定。普通培養基採用121℃、103.42kPa滅菌15min,但容器和裝量較大時,應延長至20min。含糖培養基115℃、68.85kPa滅菌30min。含糖、血清、 雞蛋等培養基可用流動蒸汽及血清凝固器80—100℃、30min,連續3d,間歇滅菌。血清或組織液,採用低熱56—58水浴1h,連續5—6d滅菌,一些遇高溫即被破壞的物質如尿素、腹水等,可用細菌過濾器,過濾除菌。高壓滅菌應嚴格按照操作規程執行,必須逐漸加熱,徹底排除滅菌器內的空氣,再逐漸升壓保持預定的壓力和時間,達到全部殺滅微生物。以上的滅菌時間和溫度要經過驗證確認,如不同類型培養基混合一起滅菌時宜採用115℃、68.85kPa滅菌30min為好。
通過無菌技術為測試制備的每一批培養基其PH在放冷至室溫(25°)後,都應測定。一個扁平的pH計用於培養基表面pH值的測定,浸入式的pH計用於液體的測定。各供應商提供的培養基的pH應該在規定的±0.2的范圍內,除非通過驗證得到更寬的范圍
注意:按配方計算培養基中各種成分的用量→稱量,(一般動作要迅速一些,因為其中可能有些成分容易吸潮)→溶化(將稱好的各種成分溶解在水中,如果是固體培養基,需要使用凝固劑,如瓊脂等,熔化時,注意攪拌,防止糊底)→調pH→滅菌(高壓蒸汽滅菌)→倒平板
1)確認培養基的成分,並精確稱量;
2)加入各個成分的順序;
3)准確調pH;
4) 適當的滅菌方法;
5)無菌條件下分裝.