蛋白質提取液的配置遵循哪些原則

⑴ 植物組織蛋白質提取用什麼方法

植物組織蛋白質提取方法
1、根據樣品重量（1g樣品加入3.5ml提取液,可根據材料不同適當加入）,准備提取液放在冰上.
2、把樣品放在研缽中用液氮研磨,研磨後加入提取液中在冰上靜置（3-4小時）.
3、用離心機離心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃
4、提取上清夜,樣品制備完成.蛋白質提取液：300ml1、1Mtris-HCl（PH8） 45ml2、甘油（Glycerol）75ml3、聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpolypyrrordone）6g這種方法針對SDS-PAGE,垂直板電泳!

⑵ 蛋白質的提取

稀鹽和緩沖系統的水溶液對蛋白質穩定性好、溶解度大、是提取蛋白質最常用的溶劑，通常用量是原材料體積的1-5倍，提取時需要均勻的攪拌，以利於蛋白質的溶解。提取的溫度要視有效成份性質而定。一方面，多數蛋白質的溶解度隨著溫度的升高而增大，因此，溫度高利於溶解，縮短提取時間。但另一方面，溫度升高會使蛋白質變性失活，因此，基於這一點考慮提取蛋白質和酶時一般採用低溫（5度以下）操作。為了避免蛋白質提以過程中的降解，可加入蛋白水解酶抑制劑（如二異丙基氟磷酸，碘乙酸等）。
下面著重討論提取液的pH值和鹽濃度的選擇。
1、pH值
蛋白質，酶是具有等電點的兩性電解質，提取液的pH值應選擇在偏離等電點兩側的pH
范圍內。用稀酸或稀鹼提取時，應防止過酸或過鹼而引起蛋白質可解離基團發生變化，從而導致蛋白質構象的不可逆變化，一般來說，鹼性蛋白質用偏酸性的提取液提取，而酸性蛋白質用偏鹼性的提取液。
2、鹽濃度
稀濃度可促進蛋白質的溶，稱為鹽溶作用。同時稀鹽溶液因鹽離子與蛋白質部分結合，具有保護蛋白質不易變性的優點，因此在提取液中加入少量NaCl等中性鹽，一般以0.15摩爾。升濃度為宜。緩沖液常採用0.02-0.05M磷酸鹽和碳酸鹽等滲鹽溶液。

⑶ 細胞蛋白質提取液（PBS，PMSF，蛋白酶抑制劑）各需要加多少呢

6孔板加150-250ul裂解液（含1mM PMSF），PMSF是蛋白酶抑制劑，與裂解液配比1:100