配置母液為什麼要按順序加入葯品
㈠ 配製培養基的步驟
1、配製溶液
向容器內加入所需水量的一部分,按照培養基的配方,稱取各種原料,依次加入使其溶解,最後補足所需水分。對蛋白腖、肉膏等物質,需加熱溶解,加熱過程所蒸發的水分,應在全部原料溶解後加水補足。
配製固體培養基時,先將上述已配好的液體培養基煮沸,再將稱好的瓊脂加入,繼續加熱至完全融化。並不斷攪拌,以免瓊脂糊底燒焦。
2、調節pH值
用pH試紙(或pH電位計、氫離子濃度比色計)測試培養基的pH值,如不符合需要,可用10%HCl或10%NaOH進行調節,直到調節到配方要求的pH值為止。
3、過濾
用濾紙、紗布或棉花趁熱將已配好的培養基過濾。用紗布過濾時,最好折疊成六層,用濾紙過濾時,可將濾紙折疊成瓦棱形,鋪在漏鬥上過濾。
4、分裝
已過濾的培養基應進行分裝。如果要製作斜面培養基,須將培養基分裝於試管中。如果要製作平板培養基或液體、半固體培養基,則須將培養基分裝於錐形瓶內。
分裝時,一手捏松彈簧夾,使培養基流出,另一隻手握住幾支試管或錐形瓶,依次接取培養基。分裝時,注意不要使培養基粘附管口或瓶口,以免浸濕棉塞引起雜菌污染。
裝入試管的培養基量,視試管和錐形瓶的大小及需要而定。一般製作斜面培養基時,每隻15×150毫米的試管,約裝3~4毫升(1/4~1/3試管高度),如製作深層培養基,每隻20×220毫米的試管約裝12~15毫升。每隻錐形瓶裝入的培養基,一般以其容積的一半為宜。
5、加棉塞
分裝完畢後,需要用棉塞堵住管口或瓶口。堵棉塞的主要目的是過濾空氣,避免污染。棉塞應採用普通新鮮、乾燥的棉花製作,不要用脫脂棉,以免因脫脂棉吸水使棉塞無法使用。
製作棉塞時,要根據棉塞大小將棉花鋪展成適當厚度,揪取手掌心大小一塊,鋪在左手拇指與食指圈成的圓孔中,用右手食指插入棉花中部,同時左手食指與姆指稍稍緊握,就會形成1個長棒形的棉塞。
棉塞作成後,應迅速塞入管口或瓶口中,棉塞應緊貼內壁不留縫隙,以防空氣中微生物沿皺折侵入。棉塞不要過緊過松,塞好後,以手提棉塞、管、瓶不下落為合適。棉塞的2/3應在管內或瓶內,上端露出少許棉花便於拔取。塞好棉塞的試管和錐形瓶應蓋上厚紙用繩捆札,准備滅菌。
6、製作斜面培養基和平板培養基
培養基滅菌後,如製作斜面培養基和平板培養基,須趁培養基未凝固時進行。
(1)製作斜面培養基。在實驗台上放1支長0.5~1米左右的木條,厚度為1厘米左右。將試管頭部枕在木條上,使管內培養基自然傾斜,凝固後即成斜面培養基。
(2)製作平板培養基。將剛剛滅過菌的盛有培養基的錐形瓶和培養皿放在實驗台上,點燃酒精燈,右手托起錐形瓶瓶底,左手拔下棉塞,將瓶口在酒精燈上稍加灼燒,左手打開培養皿蓋,右手迅速將培養基倒入培養皿中,每皿約倒入10毫升,以鋪滿皿底為度。
鋪放培養基後放置15分鍾左右,待培養基凝固後,再5個培養皿一疊,倒置過來,平放在恆溫箱里,24小時後檢查,如培養基未長雜菌,即可用來培養微生物。
㈡ 培養基的配製有哪些
1.培養基
培養基的種類較多,常常是不同種的植物要求的培養基成分不同。根據培養植物,選用適宜的培養基。現將常用的幾種培養基組成介紹給讀者,供參考。
(1)MS培養基
(1)MS培養基
(2)White培養基
(2)White培養基
(3)Vacin and Went(VW)培養基
(3)Vacin and Went(VW)培養基
(4)Kundson C(KC)培養基
(4)Kundson C(KC)培養基
2.培養基母液的配製和保存
經常配製培養基,為減少工作量及便於低溫貯藏,一般配成比所需濃度高10~100倍的母液,配製培養基時只要按比例量取即可。配好的母液需裝在棕色小口瓶中,存放在0~4℃冰箱中可使用半年至1年。如發現有沉澱物則不可再用,需重新配製。MS培養基母液配製如下:
3.培養基的配製過程
將母液從冰箱中取出,依次排好,按需要定量吸取,放入量筒中。稱取瓊脂,加少量水後加熱,並不斷攪拌,直到全部溶化。再加入稱好的糖和前面備好的各種成分,不斷攪拌,使之充分混合。測定已配好的培養基氫離子濃度(酸鹼度),用0.1~1.0摩爾/升(0.1~1.0摩)氫氧化鈉和鹽酸將培養基調至所需的濃度。
將配好的培養基分別灌注到培養瓶中(試管或三角瓶),用蓋子(棉塞、橡膠塞、鋁箔)將瓶蓋好,外面再包一層牛皮紙,標明編號。
培養基通常用高壓滅菌鍋滅菌。氣壓111.46~121.59千帕(1.1~1.2千克/厘米2壓力),10~20分鍾。冷卻備用。