20pcr反應體系如何配置

『壹』 配置PCR反應體系為什麼要在冰上操作

在冰上可以保持各種酶及底物不失活，同時也使得酶的活性很低
對於PCR的taq酶以及分子生物學中很多酶而言，在室溫下是有活性的，若在室溫下操作，你在東西未加好之前就已經有副反應進行了，這不利於實驗
實際上，很多時候也沒這么嚴格，PCR如果樣品不多，完全可以在室溫下操作

『貳』 配置25ul的PCR反應體系，該怎麼加關鍵是下面的問題

這個問題以前有人問過啊。mM指的是m mol/ml(毫摩/微升)，U一般是酶的活性單位，不同的酶對於U的定義不同，你可以看一下你用的酶上面有說明書，就會有U的定義。很多的普通Taq酶的活性單位是：用活性化的大馬哈魚精子DNA作為模板/引物，在74℃，30分鍾內，攝入10nmol的全核苷酸為酸性不溶物的活性定義為1個活動單位U。
另外25μl的反應體系你買的酶的說明書中就會告訴你怎麼加啊，比如如何配反應液如何加模板，自己看看吧。

『叄』 pcr反應體系如何建立

反應體系要看用的酶。酶的說明書上有標准體系。
一般taq酶的25ul體系：
pcr
buffer2.5ul
dntp
2.0ul
mg2+1.5ul
dna模板1ul
上游引物0.5ul
下游引物0.5ul
taq酶0.2ul
最後加超純水至25ul
還要按照反應結果自己調整用量。

『肆』 20微升pcr反應體系各種反應物分別應該加多少

10×擴增緩沖液2ul，4種dNTP混合物，各200umol/L 2ul，引物各10～100pmol 0.5ul，模板DNA 0.2ug，Taq DNA聚合酶0.2ul，Mg2+1.5mmol/L 1.5ul，加雙或三蒸水至20ul。

PCR所用的酶主要有兩種來源：Taq和Pfu，分別來自兩種不同的噬熱菌。其中Taq擴增效率高但易發生錯配。Pfu擴增效率弱但有糾錯功能。所以實際使用時根據需要必須做不同的選擇。

(4)20pcr反應體系如何配置擴展閱讀：

PCR反應五要素：參加PCR反應的物質主要有五種即：引物(PCR引物為DNA片段，細胞內DNA復制的引物為一段RNA鏈）、酶、dNTP、模板和緩沖液（其中需要Mg2+）。

DNA在高溫時也可以發生變性解鏈，當溫度降低後又可以復性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復性，加入設計引物，DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。

『伍』 菌液或菌落PCR的反應體系怎麼配置啊，同普通的PCR體系一樣嗎用相同的引物可以嗎

體系是相同的

• 菌液PCR一般20ul體系加1ul

• 菌落PCR建議先挑單克隆溶於10ul無菌水中，取一半作為模板擴增，另一半可以作為菌種保留，如果PCR鑒定正確，再拿出來接種搖菌。

兩種方法，在PCR程序上最好預變性時間長點，10min左右，或者先對細菌95度處理10min然後立即放到冰上進行預處理，以保證細菌中的質粒裂解釋放。

『陸』 PCR反應體系怎麼加

你給的信息比較少呀。
你買PCR酶（taq/pfu）的時候會附贈buffer，一般是10X，50uL體系加5uL就可以了。
引物合成回來是粉末，一般溶解成100uM的儲存液，然後稀釋成10uM的工作液，50uL體系中0.4uM就是各2uL。
模板的話，必須要看你是什麼樣的DNA了。是質粒？片段？還是cDNA文庫？不同的模版加的不一樣，模版不一定非要按照固定量加。
dNTP買來一般是2.5mM的工作液，加2uL。
酶加1uL足夠了。剩下的用ddH2O補足50uL。
先說這么多，希望你能補充一些你的實驗細節，才好說具體的用量。

『柒』 新手出道！急求：如何將100uL的標准PCR反應體系改為20uLPCR反應體系是各成分含量縮小五倍嗎

10×擴增緩沖液 2ul， 4種dNTP混合物 各200umol/L 2ul， 引物各10～100pmol 0.5ul， 模板DNA 0.1～2ug，Taq DNA聚合酶0.2ul，Mg2+1.5mmol/L 1.5ul，加雙或三蒸水至20ul。

『捌』 pcr反應體系如何選擇

標準的PCR反應體系：10×擴增緩沖液 10ul
4種dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10～100pmol
模板DNA 0.2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加雙或三蒸水至 100ul PCR反應五要素：參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+ 引物：引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產物的特異性取決於引物與模板DNA互補的程度.理論上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增.設計引物應遵循以下原則：①引物長度：15-30bp,常用為20bp左右.②引物擴增跨度：以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段.③引物鹼基：G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現非特異條帶.ATGC最好隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列.④避免引物內部出現二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3』端的互補,否則會形成引物二聚體,產生非特異的擴增條帶.⑤引物3』端的鹼基,特別是最末及倒數第二個鹼基,應嚴格要求配對,以避免因末端鹼基不配對而導致PCR失敗.⑥引物中有或能加上合適的酶切位點,被擴增的靶序列最好有適宜的酶切位點,這對酶切分析或分子克隆很有好處.⑦引物的特異性：引物應與核酸序列資料庫的其它序列無明顯同源性
希望有所幫助

『玖』 PCR技術的反應體系要如何確定

根據各試劑的終濃度來確定自己添加量，至於究竟應該用多大的體系我認為要根據自己的情況來確定，常用的有20,25,50等體系。建議參考別人的文獻，一般做基因克隆的文章都會寫反應體系，每種試劑用量。

『拾』 的反應體系怎麼配置啊，同普通的PCR體系一樣嗎

體系是相同的
菌液PCR一般20ul體系加1ul
菌落PCR建議先挑單克隆溶於10ul無菌水中,取一半作為模板擴增,另一半可以作為菌種保留,如果PCR鑒定正確,再拿出來接種搖菌.
兩種方法,在PCR程序上最好預變性時間長點,10min左右,或者先對細菌95度處理10min然後立即放到冰上進行預處理,以保證細菌中的質粒裂解釋放.